干貨分享：細(xì)胞轉(zhuǎn)染全攻略（上）

定義：細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。

分類：

按轉(zhuǎn)染途徑可分為：細(xì)胞轉(zhuǎn)染分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類。

按轉(zhuǎn)染結(jié)果可分為：瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

應(yīng)用：在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中。

總結(jié)：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。

不同轉(zhuǎn)染途徑的比較

1.物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例。

2.化學(xué)介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。

3.生物介導(dǎo)：方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。

理論上，最理想的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，目前看來，雖然轉(zhuǎn)染效率最高、細(xì)胞毒性低，但整個過程比較復(fù)雜復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性。

因此，無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù)，想要獲得**的轉(zhuǎn)染結(jié)果，都需要對轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行一定的優(yōu)化。

影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，從細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)，都需要考慮。

三種轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)劣都給大家準(zhǔn)備好了，有需要的同學(xué)可以截圖保存。

不同轉(zhuǎn)染結(jié)果的比較

瞬時轉(zhuǎn)染（transient transfection）

外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24~72h小時內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)和熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）

外源DNA既可以整合到宿主細(xì)胞中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記。如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。