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檢測水中大腸埃希氏菌O157：H7的HiMedia顯色培養(yǎng)基

2019-09-27 10:00來源：威正翔禹|締一生物


現(xiàn)在，市面上能見到的顯色培養(yǎng)基大多用于食品和臨床，但HiMedia廠家生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基覆蓋面廣，能用于供水行業(yè)和環(huán)境監(jiān)測站。下面為您介紹一下。


顯色培養(yǎng)基的評價常有多個指標(biāo)，如靈敏度，特異性等，它們也與所檢測的樣本類型有關(guān)。生產(chǎn)廠家經(jīng)常不提供這些指標(biāo)。但一些第三方檢測中心或研究機(jī)構(gòu)對此則有相關(guān)研究，并發(fā)表在專業(yè)期刊上。


2011年，《學(xué)術(shù)研究國際期刊》發(fā)表了一篇對顯色培養(yǎng)基的比較研究。作者來自埃及國家研究中心水污染研究部，他們通過用顯色培養(yǎng)基檢測了水中的大腸埃希氏菌O157:H7，對顯色培養(yǎng)基進(jìn)行了評價（見參考文獻(xiàn)1）。


作者指出，在水中，E. coli O157:H7可以極低水平存在，伴隨大量競爭菌群。傳統(tǒng)方法需要超過48小時完成培養(yǎng)，同時還需進(jìn)一步的生化鑒定和血清學(xué)鑒定。依據(jù)原理主要是SMAC平板，在麥康凱瓊脂基礎(chǔ)上用山梨醇替代乳糖，E. coli O157:H7不能發(fā)酵山梨醇。該方法存在一定的偏差，因?yàn)橛行〦. coli O157:H7菌株可以發(fā)酵山梨醇。


顯色培養(yǎng)基的出現(xiàn)可改善這一檢測方法。研究者采用HiMedia公司生產(chǎn)的HiCrome EC O157:H7 Selective agar。因?yàn)榇嬖谔禺愋燥@色底物，E. coli O157:H7菌落呈現(xiàn)深紫色，E. coli菌落則呈現(xiàn)淡粉色至淡紫色。


研究者收集了尼羅河地表水的60個水樣本。收集水平遵照了200年APHA發(fā)布的指南。所有水樣均收集在無菌的1L玻璃瓶中（Simax品牌，捷克共和國產(chǎn)），并在4℃條件下運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。所有樣品在收集后6小時內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。


研究用的E. coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)菌株編號為ATCC 43895。研究者除采用了HiMedia出的HiCrome EC O157:H7 Selective agar（簡稱HEC）外，還采用了美國Biolog 產(chǎn)的Rainbow agar O157（簡稱RB）。該平板為無色，在上面E. coli菌落呈現(xiàn)紅紫藍(lán)黑等不同顏色，E. coli O157:H7呈現(xiàn)深灰色至深黑色。而其他葡萄糖醛酸酶陽性菌株呈現(xiàn)紅色或洋紅色菌落。該培養(yǎng)基添加有新生霉素和亞碲酸鹽。


研究遵循了2005年APHA指南，采用薄膜過濾法對E. coli O157:H7進(jìn)行了檢測和計(jì)數(shù)。濾膜放置在培養(yǎng)基上，37℃倒置孵育24小時。對典型菌落計(jì)數(shù)，單位為CFU/100 ml。菌落的進(jìn)一步確證采用PCR法。最終計(jì)算得出靈敏度（真陽性率）、特異性（真陰性率）、總有效率（即（真陽性+真陰性）×100/總數(shù)），并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（t檢驗(yàn)）。


結(jié)果見表1、表2、表3和表4。


表1. 在不同培養(yǎng)基上，E. coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)菌株的菌落特征

菌株

培養(yǎng)基

陽性菌落

正確數(shù) (%)

假陰性菌落

假陰性數(shù)（%）

E. coli O157:H7

HEC

深紫/紫紅

30 (93.8)

淡粉/淡紫

2（6.2）

RB

灰/黑

30 (93.8)

不同顏色（如紅紫藍(lán)）

2（6.2）


表2. 非E. coli O157:H7菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落情況

菌株

培養(yǎng)基

真陰性結(jié)果 (%)

假陽性結(jié)果（%）

E. coli O157:H7

HEC

10 (100)

0（0.0）

RB

9 (90.0)

1（10.0）


表3. 培養(yǎng)基分離標(biāo)準(zhǔn)菌株的有效性


HEC

RB

PCR

真陽

30

30

30

真陰

10

9

9

假陽

0

1

1

假陰

2

2

1

靈敏度

93.7%

93.7%

96.7%

特異度

100%

90%

90%

有效率

95.2%

92.8%

95.1%


表4. 60個尼羅河水樣在不同培養(yǎng)基上E. coli O157:H7的假陽性率


分離株數(shù)量

假陽性數(shù)（%）

HEC

80

5（6.25）

RB

80

8（10.0）


可見，HiCrome EC O157:H7 Selective agar分離E. coli O157:H7具有更高的靈敏度和特異度，并已被PCR進(jìn)一步確證。顯色培養(yǎng)基不失為一種靈敏、快速、特異的方法，并且無須任何確證試驗(yàn)。


HiMedia公司是國際知名微生物產(chǎn)品生產(chǎn)商，具有40多年生產(chǎn)研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，具有WHO-GMP認(rèn)證、ISO9001，ISO13485質(zhì)量體系認(rèn)證和CE、FDA注冊登記。產(chǎn)品已行銷世界上140多個國家。


締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商，在微生物培養(yǎng)和檢測領(lǐng)域，一如既往地為您帶來優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。如需詳細(xì)了解，可訪問公司官網(wǎng)：

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參考文獻(xiàn)

R.S. Al-Wasify, G.E.El-Taweel, M.M. Kamel, M.A.El-Laithy.Comparative Evaluation of Different Chromogenic Media for Detection of E. coli O157:H7, Listeria monocytogenes and Salmonella spp. in Water. International Journal of Academic Research. 2011,3(3):113-117