快速分離水中腸球菌的方法

腸球菌屬（Enterococcus），為革蘭陽性，成雙或短鏈狀排列的卵圓形球菌，無芽胞，無莢膜，部分腸球菌有稀疏鞭毛。腸球菌最初列為D群鏈球菌，1984年，腸球菌被重新分類為腸球菌屬，在經(jīng)過DNA-DNA和DNA-RNA雜交的研究后證明它與鏈球菌屬有較遠(yuǎn)的關(guān)系。

腸球菌是人類和動(dòng)物腸道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn)，既往認(rèn)為腸球菌是對(duì)人類無害的共棲菌，但近年研究已證實(shí)了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。

腸球菌通常從食品、植物、水和土壤中分離，可能由于它的來源是糞便使得他們的天性在惡劣環(huán)境中比較耐受。在牛奶和奶酪制品中通常會(huì)找到糞腸球菌、屎腸球菌和少量的堅(jiān)忍腸球菌，偶然也會(huì)發(fā)現(xiàn)小腸腸球菌和鉛黃腸球菌。不同于其他乳酸菌，腸球菌不能被認(rèn)為是“一般認(rèn)為安全”（GRAS），并且它在水中檢測(cè)是作為糞便污染物的指標(biāo)的。一般認(rèn)為對(duì)于腸球菌的安全評(píng)價(jià)程序是一個(gè)模棱兩可的狀況。一方面，腸球菌在作為奶酪技術(shù)中作為發(fā)酵培養(yǎng)物被認(rèn)為是由積極作用的；另一方面，它們被認(rèn)為是新興的人類病原體。

由于腸球菌的表型多樣性，這使得腸球菌種的生理測(cè)試鑒定一直存在問題。此外，物種鑒定的常規(guī)實(shí)驗(yàn)往往需要很長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間。使用16S和23S rDNA基因的基因型鑒定方法更加的準(zhǔn)確，但是它們還不能區(qū)分所有腸球菌的物種（例如鶉雞腸球菌和鉛黃腸球菌有99.8%的16S rDNA的同源性）。

國(guó)標(biāo)中分離和鑒定腸球菌應(yīng)用傾注法，根據(jù)樣液在選擇性腸球菌瓊脂（36 ℃±2 ℃培養(yǎng)18 h～24 h）或KF瓊脂（36 ℃±2 ℃ 培養(yǎng)24 h～ 48h）上生長(zhǎng)的典型菌落數(shù)，在腸球菌瓊脂平板上形成帶棕色環(huán)的棕黑色菌落；在KF平板上形成暗紅色至粉紅色菌落，邊緣整齊， 用無菌接種針從每個(gè)腸球菌瓊脂平板或KF平板挑取5個(gè)典型菌落，進(jìn)一步做確證實(shí)驗(yàn)。

HiMedia公司（國(guó)際知名微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商）生產(chǎn)的快速腸球菌顯色培養(yǎng)基（貨號(hào)：M1414），該培養(yǎng)基中的蛋白胨為菌種提供氮源，添加的氯化鈉使腸球菌的快速生長(zhǎng)保持滲透平衡，疊氮化鈉能抑制伴隨的微生物菌落，尤其是革蘭氏陰性菌，存在于腸球菌中的酶β-D-葡糖苷酶裂解顯色底物，使菌落呈藍(lán)綠色。HiMedia的快速腸球菌顯色培養(yǎng)基用于快速鑒定和區(qū)分水樣中的腸球菌，18-24h后出結(jié)果，方便快捷。我國(guó)在新修訂的生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB5749-2006中資料性附件中增加了腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿菌，修訂后限值腸球菌/（CFU/100mL） 和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽胞桿/（CFU/100mL）限值均為0，快速腸球菌顯色培養(yǎng)基的研發(fā)，為快速檢測(cè)水中腸桿菌起到重要意義。

快速腸球菌顯色培養(yǎng)基（貨號(hào)：M1414）在國(guó)際上得到了廣泛的應(yīng)用，如Chellandi Mohandass等人，在研究喀徹灣沿岸的沿海地區(qū)，潮汐周期中水質(zhì)指標(biāo)的分散性和可收回性文章中就有應(yīng)用（Chellandi Mohandass, S. Jaya KumarN, Ramaiah.Dispersion and retrievability of water quality indicators during tidal cycles in coastal Salaya, Gulf of Kachchh.Environmental Monitoring and Assessment[J], 2010, 169(10): 639–645）；Krishna M. Raja等人，推定致病性標(biāo)記香港海鷗形菌的ESBL基因和脂多糖的分子生物學(xué)研究中也有應(yīng)用（Krishna M. Raja ,Asit Ranjan Ghosh. Molecular Insight of Putative Pathogenicity Markers with ESBL Genes and Lipopolysaccharide in Laribacter hongkongensis.Applied Biochemistry and Biotechnology[J], 2014, 174(5) : 1935–1944.）