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如何準(zhǔn)備用于生長促進曲線測定的細胞

2017-07-07 10:17

　　要進行細胞生長曲線的測定，來反映FBS的功能，需要先準(zhǔn)備足夠的有活力的細胞。威正翔禹/締一生物根據(jù)美國藥典（USP）的描述分析如何準(zhǔn)備用于生長促進曲線測定的細胞。


如何準(zhǔn)備用于生長促進曲線測定的細胞


　　用37℃水浴快速解凍一管FBS。計數(shù)細胞并觀察活力。用添加FBS的完全培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)細胞，具體遵循ATCC對相應(yīng)細胞提供的指導(dǎo)。鏡下觀察，保證細胞均一分布，貼壁或懸浮接近長滿。細胞再傳代，直至培養(yǎng)的細胞數(shù)足夠用于檢測（總細胞數(shù)需要1X107個，活力大于90%）。

　　收獲細胞時，先棄掉上清，用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基沖洗；對貼壁細胞，加1 mL of Trypsin/EDTA消化，必要時用1ml不低于10%FBS的培養(yǎng)基中和。離心，棄上清，細胞重懸。此時，細胞即可用于接種。

　　接種細胞時，應(yīng)測試**的接種密度，起始密度范圍為2×103~2×104活細胞/mL。選取至少5個時間點，3個復(fù)孔，以確定細胞**接種密度。在37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱孵育。對7天內(nèi)的每個時間點的培養(yǎng)細胞進行拍照（第0,1,2,3,4,7天）。應(yīng)采用待測試的血清和USP的參考血清，測試三種血清濃度。記錄下每種條件下細胞的匯合度。在預(yù)定的時間點上收獲細胞。對細胞總數(shù)和活力進行計數(shù)。

　　綜上所述，您是不是已經(jīng)對如何準(zhǔn)備用于生長促進曲線測定的細胞，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢威正翔禹/締一生物資深專家免費熱線：400-166-8600。