反復凍融的血清對細胞有什么影響?

　　血清中因含有許多蛋白質，反復凍融對蛋白的活性肯定會有一定的影響，這似乎已眾所周知。因此，如果幾次內用不完，應盡量分裝，這不僅適用于血清，也適用于其他儲存于-20℃的蛋白質類產品。本文威正翔禹/締一生物為您分析反復凍融的血清對細胞有什么影響？

　　曾有研究發現，血清凍融三次，對腫瘤標志物的濃度影響不大¹，對于血漿，有報道在短時間內反復凍融三次，對總蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影響不大，但作者推測對免疫球蛋白的活性有影響2。最重要的是一篇西北民族學院的文章，《反復凍融新生牛血清對促細胞生長效應的影響》，作者針對SP2/0細胞，用MEM培養基和三批新生牛血清進行培養。血清分別凍融4次至28次不等。然后繪制細胞生長曲線，根據公式t =T/A , A=log₂ Y/X計算細胞倍增時間（t 為細胞倍增時間， Y 為細胞峰值前1 d 的細胞數， X 為接種細胞數， T 為細胞生長時間）。結果顯示：選用的三批新生牛血清在反復凍融 28 次時， 血清促細胞生長的**增殖量變化不大，均高于1×10⁶/mL, 但是血清促細胞生長的倍增時間在反復凍融 20次時延長， 即血清促細胞繁殖一代所需的時間在凍融次數達到 20 次時顯著增加。筆者觀察了一下該文章的結果列表，發現在凍融20次之前，細胞倍增時間延長2-3小時不等，20次時，則延長3-4小時。可見，影響還是比較顯著的。該文章的局限是針對新生牛血清，而沒有對胎牛血清進行測試。

　　國外有人對大鼠血清中的18種化學成分進行了檢測，發現反復凍融3次對其中的14種成分沒有顯著影響，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，膽紅素，甚至包括氯離子有一些明顯變化，但其濃度變化控制在10%以內。³

　　總而言之，如果能避免牛血清的反復凍融，及時分裝，那是最理想的。如果在短時間內有幾次反復凍融，也不必過于擔心。但是，對于胎牛血清，還有一個問題，是反復凍融增高了血清產生沉淀或渾濁的風險。因為血清在融化時，冰塊和蛋白融化的速度是不一樣的，局部可能因蛋白濃度過高而產生沉淀。同時，如果血清內含有少量纖維蛋白原，那么在低溫下也可以形成絮狀沉淀⁴，等到血清再融化時，沉淀就顯現出來了。所以，血清的質量也非常重要。

　　參考文獻

　　1、血清反復凍融對腫瘤標志物濃度的影響。 《中國實驗診斷學》2007, 11 （1） :119-120

　　2、普通血漿短時間內反復凍融對血漿蛋白的影響。《中國輸血雜志》， 2012 , 25 （11） :1209-1209

　　3、Effect of repeated freezing and thawing on 18 clinical chemistry analytes in rat serum. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS ·2012,51（4）：475-478

　　4、凍融法提取豬血纖維蛋白原。《分析試驗室》，2007,26（4）：65-68

　　綜上所述，您是不是已經對反復凍融的血清對細胞有什么影響，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢威正翔禹/締一生物資深專家免費熱線：400-166-8600。