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這么用血清,當(dāng)心實(shí)驗(yàn)被毀!

2022-07-04 14:43來(lái)源:威正翔禹|締一生物

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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的小細(xì)節(jié)


細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是眾多科研項(xiàng)目的基礎(chǔ),而細(xì)胞培養(yǎng)作為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)最基礎(chǔ)的技術(shù)之一,更是滲透到了生物學(xué)研究的方方面面。


打好根基,上層建筑才能穩(wěn)固。細(xì)胞培養(yǎng)中血清使用方法的一些小細(xì)節(jié),往往能夠影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的好壞,甚至是成敗。


今天我們匯總了一些錯(cuò)誤案例,拿給給大家敲敲警鐘,這些錯(cuò)誤,可千萬(wàn)別再犯!


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Vol.1/   血清直接4℃解凍

4℃過(guò)夜解凍   ×××

三步法解凍    √√√


如何解凍血清,也是個(gè)老生常談的話題了。很多小伙伴還是習(xí)慣將血清從-20℃冰箱中拿出來(lái)后,直接丟進(jìn)4℃冰箱過(guò)夜,甚至是直接放在操作間,室溫環(huán)境下解凍,第二天一早直接開始實(shí)驗(yàn)。


這樣做都會(huì)導(dǎo)致血清出現(xiàn)融化不均勻的情況,使血清產(chǎn)生大量沉淀,影響血清品質(zhì)。


一旦產(chǎn)生大量沉淀,不少小伙伴就會(huì)離心或者過(guò)濾取出絮狀物,讓本來(lái)營(yíng)養(yǎng)豐富的血清,變得“寡淡”,細(xì)胞缺少相關(guān)蛋白、因子,自然更容易“營(yíng)養(yǎng)不良”,細(xì)胞狀態(tài)不好,實(shí)驗(yàn)結(jié)果也可想而知。


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因此,強(qiáng)烈推薦大家使用三步法溶解。


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這樣解凍的血清質(zhì)地澄清且均勻,不易產(chǎn)生大量沉淀。保證血清品質(zhì),讓細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)充分,做起實(shí)驗(yàn)來(lái)更得心應(yīng)手。


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Vol.2/   一勞永逸法配血清

配超多培養(yǎng)基慢慢用×××

現(xiàn)用現(xiàn)配                  √√√


為了省事,會(huì)解凍一大桶血清,然后配制成完全培養(yǎng)基,放在冰箱里慢慢用。這其實(shí)是非常不好的習(xí)慣。


完全培養(yǎng)基中的成分,例如:L-谷氨酰胺、抗生素,在室溫甚至是4℃冰箱中,都是比較容易分解的,血清也容易產(chǎn)生沉淀。


因此,如果配制好的培養(yǎng)基,長(zhǎng)期儲(chǔ)存在4℃冰箱中,極易變質(zhì)、失活,對(duì)于細(xì)胞來(lái)說(shuō),“補(bǔ)品”秒變“毒藥”,所以我們建議,完全培養(yǎng)基在4℃冰箱中存放不要超過(guò)7天


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Vol.3/   血清一定要熱滅活

血清一定要熱滅活   ×××

根據(jù)情況決定          √√√


對(duì)于正規(guī)的胎牛血清而言,是不需要熱滅活的。


熱滅活的目的是消除補(bǔ)體對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,正規(guī)胎牛血清采血時(shí)間是5-8月齡的胎牛,此時(shí)牛胚胎還未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),因此熱滅活就顯得多此一舉了。


不僅如此,熱滅活后的血清,更容易產(chǎn)生沉淀,影響血清品質(zhì),導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。沉淀物還容易擾亂視野,造成細(xì)胞被污染了的假象。實(shí)驗(yàn)者“敵我不分”,細(xì)胞背起了“污染”的“大鍋”。


所以,如果不是從事免疫學(xué)、ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞相關(guān)研究時(shí),且使用的血清非胎牛血清,大可不必進(jìn)行熱滅活!


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