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新手→大神都想知道的細(xì)胞傳代指南2022-06-24 09:44來源:威正翔禹|締一生物
細(xì)胞培養(yǎng)的本質(zhì)是細(xì)胞克隆技術(shù)。原理就是盡可能給細(xì)胞提供類似于體內(nèi)的環(huán)境,在無菌條件下,給予適當(dāng)?shù)臏囟群退釅A度以及細(xì)胞生長繁殖所必要的營養(yǎng)條件,使其能在體外維持正常的生長繁殖,并保持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究,抗體制備,新藥篩選,基因工程等等都需要用到細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。 但在日常的細(xì)胞實驗中,實驗者經(jīng)常會遇到一些問題,今天我們就這些常見的問題給出相應(yīng)的建議,希望對小伙伴們有所幫助。 細(xì)胞培養(yǎng) Vol.1 貼壁細(xì)胞如何高效傳代? 貼壁生長的細(xì)胞,在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長至單層鋪滿的狀態(tài)后后,空間已基本上飽和,細(xì)胞生長、增殖受阻,為使其繼續(xù)擴增或生長,需要進行傳代(再培養(yǎng))處理。同時,傳代培養(yǎng)也可用于細(xì)胞種的保存。不僅如此,各種細(xì)胞實驗也是以高效的細(xì)胞傳代為基礎(chǔ)的。 懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。 一般使用胰蛋白酶,將貼壁細(xì)胞消化成成單個細(xì)胞,也可加入EDTA提高消化能力(EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+)。 常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。 實驗時,先用吸去細(xì)胞培養(yǎng)上清,用PBS清洗細(xì)胞,棄掉洗滌液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同,一般2-5ml消化液即可,以剛好鋪滿整個皿底為原則),觀察細(xì)胞直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要3-5分鐘,為了避免細(xì)胞成團,消化細(xì)胞的過程中不要拍打細(xì)胞瓶。對于特別難消化的細(xì)胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進消化,細(xì)胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的完全培養(yǎng)基中止消化。 800-1000rpm,離心5分鐘,然后棄去中止用的培養(yǎng)基,加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞,移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷,對于這種類型的細(xì)胞,可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞,加入適量的培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻細(xì)胞,然后進行傳代培養(yǎng)。 Vol.2 細(xì)胞傳代的頻率為多久? 貼壁型的細(xì)胞的匯合度約為100%的時候,需進行傳代操作。 當(dāng)細(xì)胞以克隆的形式生長時,匯合度則達不到100%。對于該類型的細(xì)胞,達到或者接近**密度的時候,即觀察不到細(xì)胞明顯擴增時,就需要進行傳代。 接觸抑制型細(xì)胞需要在細(xì)胞長滿之前傳代,避免產(chǎn)生細(xì)胞長滿后接觸抑制后產(chǎn)生性狀的改變。 懸浮型的細(xì)胞必須在細(xì)胞達到**飽和密度之前傳代,懸浮細(xì)胞傳代時只需稀釋至合適的密度,讓細(xì)胞有充足的營養(yǎng)恢復(fù)到對數(shù)生長期。 Vol.3 如何處理腫瘤細(xì)胞株? 了解每株細(xì)胞可能產(chǎn)生的生物危害是很難的。
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