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細胞培養(yǎng)中的抗生素究竟是敵是友?

2021-10-29 09:10來源:威正翔禹|締一生物

提到配制細胞培養(yǎng)基,你能想到啥?

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營養(yǎng)成分緩沖體系多數(shù)情況下都是必要的,但這抗生素,真的是必要的嗎?有了抗生素,細胞就無懼污染了嗎?


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關(guān)于抗生素在細胞培養(yǎng)過程中的意義,一直都有很矛盾,不用細胞容易污染,一直用對細胞狀態(tài)也會有影響,到底該怎么辦?今天我們就來一探究竟。



抗生素對細胞的影響


很多同學(xué)養(yǎng)細胞的手藝,都是從師兄師姐那里「傳承」來的,由于沒有辦法做到絕對的無菌,所以從經(jīng)驗角度出發(fā),前輩們都會告訴剛開始養(yǎng)細胞的同學(xué),可以在配制培養(yǎng)基的時候,加入1%左右的雙抗,防止細胞出現(xiàn)細菌污染(有些時候甚至出現(xiàn)離開抗生素,細胞沒過幾天立馬就被污染的情況)


這就造成一些小伙伴在培養(yǎng)基中「預(yù)防性添加抗生素」,其實圖的就是個心安,抱著「有了抗生素就不怕污染」的心態(tài)。但事實上,抗生素并不是「免死**」,真菌、支原體這些污染是它不能夠?qū)沟模踔翞E用還會適得其反。


這抗生素對細胞有什么影響呢?


早在十幾年前,就有很多報導(dǎo)指出β-內(nèi)酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素,對真核細胞培養(yǎng)有抑制增殖作用[1]。并且這種抑制增殖作用在原代細胞和干細胞等難養(yǎng)細胞上尤其明顯[2-3]。2017年,加州大學(xué)Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上發(fā)表文章,呼吁在細胞培養(yǎng)過程中減少抗生素的使用[4]。他們發(fā)現(xiàn)抗生素(雙抗:青霉素和鏈霉素)的使用影響人體肝細胞中基因表達與基因調(diào)控。其中有209個基因的表達發(fā)生了改變,特別是與藥物和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的基因。超過9,500個基因調(diào)控元件發(fā)生了變化,并且很多調(diào)節(jié)元件位于參與細胞分化,核酸酶活性和tRNA修飾的基因附近。雖然這些基因的數(shù)量在龐大的細胞基因庫中不值一提,但這絕對不是一個應(yīng)該被忽略的事件。


雖然抗生素對真核細胞生長的影響機制至今尚未明確,但是為了細胞更好的生長,實驗結(jié)果更加準確,實驗數(shù)據(jù)更加穩(wěn)定,在實驗過程中盡量不要隨意使用。



參考文獻:

[1] KA Neftel, Hubscher, U. Effects of beta-lactam antibiotics on proliferating eucaryotic cells.[J]. Antimicrobial Agents & Chemotherapy, 1987, 31(11):1657-61.


[2] Varghese D S , Parween S , Ardah M T , et al. Effects of Aminoglycoside Antibiotics on Human Embryonic Stem Cell Viability during Differentiation In Vitro[J]. Stem Cells Int, 2017, 2017:1-18.


[3] Nygaard U H , Niehues H , Rikken G , et al. Antibiotics in cell culture: friend or foe? Suppression of keratinocyte growth and differentiation in monolayer cultures and 3D skin models[J]. Experimental Dermatology, 2016, 24(12):964-965.


[4] Ryu A H , Eckalbar W L , Kreimer A , et al. Use antibiotics in cell culture with caution: genome-wide identification of antibiotic-induced changes in gene expression and regulation[J]. Scientific Reports, 2017, 7(1):7533.





如何有效避免污染?


抗生素對細胞有一定傷害,但是不加抗生素又要怎樣避免實驗出現(xiàn)污染的狀況呢?


1、實驗環(huán)境(包括培養(yǎng)箱內(nèi)部、冰箱、超凈臺)要進行定期徹底的消毒,用消毒液(75%乙醇溶液、新潔爾滅等)擦拭地面墻面桌面等地方,不留衛(wèi)生死角;紫外線照射30分鐘以上。

2、定期用支原體祛除試劑清潔超凈臺臺、桌面等地方。


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3、培養(yǎng)箱、水浴鍋的水槽要定期清潔,用支原體預(yù)防試劑處理。

4、細胞房實驗要用專用的實驗服:進入細胞房正式實驗前須換上專用防護服、專用鞋或鞋套。

5、實驗廢料不在細胞房堆積,及時清理。

6、遵照細胞實驗操作方法,實驗過程中嚴格無菌操作


另外,選擇一款合格的實驗試劑也很重要。就拿血清來說,合格的血清產(chǎn)品,一定要有明確的檢測報告,指出微生物檢測情況。


Ausbian血清為例:各項指標(biāo)均符合要求。

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Ausbian血清的獨特優(yōu)勢

    1. 精選內(nèi)毒素更低批次(≤3EU/ml),原裝進口。是細胞典藏等重大項目十幾年的穩(wěn)定供應(yīng)品牌。


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    3. 每個批次產(chǎn)量800-2000升,試用滿意的實驗室批號優(yōu)先鎖定,保證大多數(shù)項目兩年不需換批次,細胞試驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定。


    4. 每年按廠家生產(chǎn)順序,會有多批次平行供應(yīng),每個實驗室專屬批號管理,保證供貨穩(wěn)定。


所有血清出廠前,均經(jīng)過嚴格質(zhì)控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應(yīng)等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。


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