細(xì)胞培養(yǎng)前期都需要準(zhǔn)備什么

今天分享實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)人員的培養(yǎng)細(xì)胞的心得，希望給做細(xì)胞培養(yǎng)新手啟發(fā)。怎么才能培養(yǎng)出符合條件的細(xì)胞呢？

1、選擇正確的培養(yǎng)基

在養(yǎng)細(xì)胞之前，就要了解，你所養(yǎng)細(xì)胞的來(lái)源以及種類和名稱，查閱一定量的文獻(xiàn)，確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分，常用的細(xì)胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等等，一些常見(jiàn)的細(xì)胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來(lái)培養(yǎng)，有的需要加入一定其他成分，這需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型，查ATCC細(xì)胞庫(kù)或者查文獻(xiàn)，才能找到所需**培養(yǎng)液。選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細(xì)胞的**步。

2、了解細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性

不同的細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性不同。如成纖維細(xì)胞是貼壁生長(zhǎng)，有一定的密度依賴性，密度小可能會(huì)出現(xiàn)不增殖，狀態(tài)差的情況，接種密度大時(shí)則需要隔天傳代，頻繁傳代則影響細(xì)胞狀態(tài)；再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，是懸浮生長(zhǎng)的，傳代需離心棄去上清即可。總之，了解細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性，再加上正確的計(jì)數(shù)，才能掌握好傳代的密度。

3、選擇優(yōu)質(zhì)的血清

血清中含有細(xì)胞生長(zhǎng)所必須的生長(zhǎng)因子，作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的附加物，血清的添加是十分重要的，因此，選擇優(yōu)質(zhì)的血清，是細(xì)胞養(yǎng)殖成功與否的關(guān)鍵！

4、及時(shí)傳代和更換培養(yǎng)液

在細(xì)胞增殖到一定的密度后，要及時(shí)傳代，根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和密度，及時(shí)更換培養(yǎng)液。更換過(guò)勤，浪費(fèi)培養(yǎng)液，更換不夠及時(shí)，則細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)差，一般需隔天更換培養(yǎng)液，具體可根據(jù)所養(yǎng)細(xì)胞種類予以調(diào)整。

5、絕對(duì)的無(wú)菌意識(shí)

前面林林總總?cè)慷甲⒁夂昧耍绻麩o(wú)菌意識(shí)差，細(xì)胞中混入了微生物，則千里之堤潰于蟻穴，細(xì)菌的生長(zhǎng)速度和破壞力，將迅速占領(lǐng)培養(yǎng)皿，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，有些初學(xué)者會(huì)在培養(yǎng)液中加入1%的雙抗，但是，無(wú)菌意識(shí)不強(qiáng)，雙抗亦無(wú)法拯救你的細(xì)胞！

6、傾心的呵護(hù)，頻繁的觀察

做到以上幾點(diǎn)，就可以開(kāi)始養(yǎng)你的細(xì)胞了，但是再次重申細(xì)胞嬌弱，在養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中，難免會(huì)出現(xiàn)一些意想不到的問(wèn)題，要想成功養(yǎng)好細(xì)胞，時(shí)時(shí)惦記它 ，頻繁地觀察，初期一天觀察2次都不足為過(guò)，出現(xiàn)任何預(yù)料外的情況，及時(shí)處理，才能保障收獲一盤(pán)“漂亮”的細(xì)胞。