新型『無動物源』細胞培養基，疫苗生產專用

在生物制藥領域，動物源原料存在安全風險，針對此風險，國際各大藥典制定了相關規范：

如《歐洲藥典》（EP8.0,2014)第5.2.8章強調了醫用產品的生產應優先考慮使用“非TSE相關動物物種材料”或“無動物源材料”，使安全風險最低化。

《美國藥典》也明確規定，為減少TSE傳播的潛在風險，建議使用無動物源生產原料代替動物源原料。

在疫苗生產領域，無動物源培養基的使用不僅可以使安全風險最小化，而且存在諸多優點。

疫苗生產用『無動物源』培養基的優點

生產疫苗使用的動物源細胞培養基，具有潛在的安全風險，且存在批間差異，審批手續繁瑣等問題。

而無動物源培養基有著極大地優越性：

1.無動物源培養基完全避免了因原材料導致接種者感染外源病毒的風險

2.防止了動物源原料帶來的病毒干擾目標病毒

3.無血清的配方，使細胞懸浮培養更容易，減少細胞成團，利于疫苗廠大規模懸浮培養

4.無動物源配方，批間差異更小，利于工業化穩定生產

5.原料無動物源成份，使疫苗審批的申報流程更簡便

6.無動物源培養基，在海關進口時，手續更簡便，保證原料更快捷地能及時供應

無動物源培養基已被全球疫苗生產廠家大量使用，其中一款Himedia公司研制的新型的CELLin1?培養基，更是因其應用面廣，細胞培養效果佳，病毒產量大，而表現上佳。

CELLin1?培養基適用的疫苗品種范圍

CELLin1?適用于以下疫苗生產常用的5種細胞

CELLin1?作為一種

新型『無動物源』培養基，

專門用于培養上述五種細胞，

且具有非常好的培養效果。

CELLin1?『病毒生產能力』和『促細胞生長能力』

驗證報告

1.實驗信息

本實驗使用CELLin1?無動物源培養基與競品OptiPRO?SFM (Gibco)無動物源培養基分別培養細胞。

實驗選用的細胞系：

MDBK細胞，牛皰疹病毒1型(BHV-1)

MDCK細胞，流感病毒A

PK-15細胞，豬圓環病毒2型（PCV）

Vero細胞，狂犬病毒

B.實驗觀測指標

1.病毒產生能力（96孔板內進行）

1.1生長曲線：檢測培養基維持細胞生長和達到高細胞密度和高活力的能力

1.2病毒滴度：檢測培養基支持病毒在宿主細胞內繁殖的能力

2.種子制備和細胞存儲

宿主細胞系的存儲和種子制備是病毒疫苗生產前的2個主要步驟。通過連續傳代，檢測CELLin1?支持宿主細胞生長的能力。

C.實驗結果

MDBK細胞

采用CELLin1?培養MDBK細胞，

BHV1病毒滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數據表明，CELLin1?培養的細胞少反而得到了更大的病毒產量，CELLin1?培養的MDBK細胞更健康、更有活力，產毒能力更強。

MDBK細胞在T175培養瓶中，

用CELLin1?或競品培養基培養和連續傳代。

當細胞長至70-80%時進行傳代（下圖）。

CELLin1?連續五代培養的MDBK細胞數量遠高于競品，而且細胞生長更穩定。

MDCK細胞

采用CELLin1?培養MDCK細胞，

流感病毒A滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數據表明，CELLin1?培養的MDCK細胞產毒能力更強。

連續五代培養，CELLin1?培養的MDCK細胞數量遠高于競品，對細胞的支持非常穩定。

PK-15細胞

采用CELLin1?培養PK-15細胞，

豬圓環病毒滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數據表明，CELLin1培養基更適合PK-15細胞生長。

PK-15細胞在T175培養瓶中，

用CELLin1?或競品培養基培養和連續傳代。

當細胞長至70-80%時進行傳代（下圖）。

連續五代培養，CELLin1?培養的PK-15細胞數量均高于競品，對細胞的支持非常穩定。

Vero細胞

采用CELLin1?培養Vero細胞，

狂犬病毒滴度用TCID50（108） 表示（下圖）。

數據表明，CELLin1?培養的細胞少反而得到了更大的病毒產量。CELLin1?培養的Vero細胞更健康、更有活力，產毒能力更強。

Vero細胞在T175培養瓶中，

用CELLin1?或競品培養基培養和連續傳代。

當細胞長至70-80%時進行傳代（下圖）。

通過連續五代培養，與競品的細胞密度對比，CELLin1?對Vero細胞的支持非常穩定。

D. 結論

CELLin1?支持Vero、PK-15、MDCK、MDBK細胞生長和病毒繁殖的能力已得到了驗證。

在這些細胞系中，CELLin1?顯示出**的病毒生產能力和促細胞生長能力。

因而，CELLin1?可有效的作為通用培養基用于Vero、PK-15、MDCK、MDBK細胞的病毒生產。

CELLin1?的配制方法

CELLin1?是一款化學限定的

疫苗生產用『無動物源』培養基，

分為A、B兩個部分。

A部分為基礎培養基，

呈白色至淺粉色均勻粉末，2-8 ℃避光保存。

B部分為生長添加劑，

呈無色透明溶液，-20 ℃保存.

1L規格的CELLin1?配制步驟

取11.5g A部分用900ml組織培養級別水重懸，持續攪拌直至粉末完全溶解。不要加熱。

加入2.70g碳酸氫鈉粉末或36.0ml 7.5％碳酸氫鈉溶液配制1升培養基。攪拌至溶解。

加入584mg的L-谷氨酰胺粉末或加入20mL濃度為200mM的L-谷氨酰胺以制備1升培養基。攪拌至溶解。

用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH將pH調節至低于理想pH值0.2-0.3單位水平，因為pH值在過濾后趨于上升。

用組織培養級別水將體積補足至1000ml。

立即用孔徑≤0.22μM濾器過濾培養基以滅菌。使用正壓而非真空抽濾，以減少CO2的丟失。

在2-8℃解凍生長添加劑（B部分）。

在A部分和B部分放入生物安全柜之前，對兩部分瓶子表面噴灑異丙醇進行消毒。

在無菌條件下將B部分全部內容物轉移至1L基礎培養基（A部分）中，輕輕混合。

配置完全的培養基可直接使用。儲存時，完全培養基在2-8℃下的保質期為8周。

     注：在使用過程中，還需要細胞的無血清馴化。

CELLin1?產品信息

品名：CELLin1?化學限定疫苗生產用無動物源成分培養基

英文名：CELLin1? Chemically defined, Animal Component Free Virus Production medium

貨號：SFM036AP

生產商：HiMedia Laboratories

生產地：印度

組成：

A部分為基礎培養基，干粉，2-8℃保存

B部分為生長添加劑，液體，-20 ℃保存

內毒素含量：小于1EU/ml

市場價：

1L/套    ￥950

10L/套   ￥8000

廠家介紹:

HiMedia   Laboratories公司是世界**的培養基生產廠家。HiMedia公司總部位于印度，50年致力于微生物培養基和細胞培養基的研發生產，在制藥等工業生產中被廣泛應用，其產品行銷全球140多個國家。尤其是HiMedia公司的非動物源培養基，在國際上占絕對領先地位。

HiMedia公司生產的培養基都具備

WHO GMP、ISO9001、

ISO13485質量管理體系認證

和CE、FDA注冊登記，

能更好地應用于工業化生產。

2019年，HiMedia公司的CELLin1?產品正式進入中國，由北京締一生物作為總代理。北京締一生物被中國生物界譽為值得“持續信賴的供貨商”，在細胞培養的工業化生產領域有著專業的技術背景，為國內疫苗生產（如流感疫苗，禽流感疫苗，豬藍耳疫苗等）提供了有力的幫助和支持。

現今我們引入CELLin1?給科研人員和工業藥廠，希望能幫助藥廠進一步發展，使我國疫苗生產領域能邁上一個全新的高度！