方便雙歧桿菌計數的顯色培養基

近年來，雙歧桿菌作為益生菌，越來越得到人們的重視。一方面，在生產中，需要進行雙歧桿菌的培養，另一方面，在酸乳等食品乳品中，又需要雙歧桿菌的計數。因為雙歧桿菌只有活菌數達到106 CFU/mL以上時，才能發揮正常生理功能；數量太少，則達不到保健的效果。

在培養雙歧桿菌時，需要了解雙歧桿菌為專性厭氧菌，適宜生長的環境pH值為6.7~7.0。它為革蘭氏陽性，無運動性，包括至少25個種，適合生長溫度在25℃-45℃。雙歧桿菌對碳水化合物的代謝終產物為乳酸和醋酸。

雙歧桿菌原本可以作為指示菌，因為它在糞便中出現的頻率非常高。有人研究發現，嬰兒出生后母乳喂養一周，腸道中雙歧桿菌數可占92%，而健康成年人僅有10%。但雙歧桿菌生長緩慢，且嚴格厭氧，培養很不方便，因此并沒有作為糞便的指示菌。

當今食品發展的趨勢是，應用雙歧桿菌越來越多，且乳桿菌與雙歧桿菌同時添加。這種混合發酵，多見于酸奶與保健品。在酸奶中，常應用嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌在牛奶中發酵 , 以使產品具有酸奶特有的細膩圓潤的凝乳狀態。而如果只單一使用雙歧桿菌發酵，則風味與口感不佳。但混合發酵也帶來一個問題，即給雙歧桿菌的計數帶來麻煩。一方面，雙歧桿菌與乳桿菌都屬于乳酸菌，性能接近，另一方面，雙歧桿菌隨著傳代次數增多，會發生變異成桿狀，因此通過鏡下形態鑒別不太可靠。如果能有一款商品化的雙歧桿菌顯色培養基，則可給雙歧桿菌的鑒別和計數帶來極大的便捷。

世界知名微生物培養基生產商HiMedia開發有一款雙歧桿菌顯色培養基（品名：HiCrome?Bifidobacterium Agar），它可用于雙歧桿菌與乳桿菌混合發酵的酸乳等制品菌落的鑒別計數。該顯色培養基中含有特別蛋白胨、牛奶蛋白、氯化鈉、顯色劑和瓊脂。牛奶蛋白能檢測雙歧桿菌的酪蛋白水解活性，從而使菌落表現出光暈。顯色劑則可鑒別乳桿菌和雙歧桿菌。乳桿菌屬通常表現為綠色菌落和霧狀背景（發酵乳桿菌例外，菌落為粉色，無光暈），雙歧桿菌則根據物種不同，菌落顏色也有所區別：嬰兒雙歧桿菌表現為深藍色至藍綠色菌落。短雙歧桿菌表現為粉紅色菌落，并且有光暈。據了解，雙歧桿菌在成人體內的菌種主要是青春雙歧桿菌和長雙歧桿菌。在嬰兒為嬰兒雙歧桿菌和短雙歧桿菌。

圖. 右上為嬰兒雙岐桿菌ATCC 25962，左上為短雙歧桿菌ATCC 15698，下為植物乳桿菌ATCC 8014

雙歧桿菌在許多制品以及人和動物腸道內，大多與其他菌（如乳酸菌）混合生長，而且生長特點相近，很難區分。要對其進行計數，需設計特定的選擇培養基。雙歧桿菌顯色培養基一方面要求能保證雙歧桿菌的生長，同時要求選擇性高，對雜菌的抑制性強，雙歧桿菌菌落呈現顯著的顏色或形態上的特征。傳統培養雙歧桿菌培養時間較長，需要 96小時才能出結果，而該顯色培養基則只需在無氧條件下35-37℃孵育48小時，即可知道準確結果。顯色培養方法的特異性也很高，能夠保證培養結果的準確性。

HiCrome?雙歧桿菌顯色培養基能快速有效地檢測雙歧桿菌，這對于辨別產品中添加雙歧桿菌的數量具有重要意義。HiCrome?雙歧桿菌顯色培養基能實現一步培養直接計數，基本能夠滿足實驗室對雙歧桿菌初步檢測計數的需要，特別適合不擁有大型細菌鑒定儀的中小企業和第三方實驗室。

圖. 短雙歧桿菌

圖. 植物乳桿菌