單增李斯特菌檢測方法的改進(jìn)

在熟肉制品，即食生肉制品、干酪、再制干酪以及飼料中，常需檢查單增李斯特菌的存在，因?yàn)檫@些地方也是。李斯特菌屬有七個(gè)菌種，其中單增李斯特菌為致病菌，和人類關(guān)系最為密切。但單增李斯特菌的檢驗(yàn)較為費(fèi)時(shí)，前期增菌、分離外，后期還要做鑒定。目前，李斯特菌顯色培養(yǎng)基已得到普遍應(yīng)用，并發(fā)現(xiàn)優(yōu)于PALCAM平板，因?yàn)楹笳邿o法區(qū)分是單增李斯特菌與英諾克李斯特菌，但前者可以。但目前市面上大多數(shù)的李斯特菌顯色培養(yǎng)基也存在不足，它在分離鑒別出單增李斯特菌的同時(shí)，無法區(qū)分出單增李斯特菌與伊氏李斯特菌，也就是說，二者菌落形態(tài)均完全相同。

實(shí)際在檢測單增李斯特菌的過程中，曾有新疆疾控中心的人員發(fā)現(xiàn)，單增李斯特氏菌與伊氏李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌誤判現(xiàn)象突出2。這三種常易混淆的李斯特菌在葡萄糖、麥芽糖、MR-VP、甘露醇、七葉苷方面的生化反應(yīng)均一致，溶血反應(yīng)可區(qū)分英諾克與單增。木糖、鼠李糖反應(yīng)可區(qū)分伊氏與單增。但溶血反應(yīng)對(duì)操作技巧要求較高，同時(shí)，木糖、鼠李糖反應(yīng)也包括在生化鑒定試劑條中，容易導(dǎo)致重復(fù)操作，比較耗時(shí)。而要進(jìn)行生化試劑條的鑒定，還需挑菌落后進(jìn)行純培養(yǎng)。

在這里，筆者給出一些不同的方案，可省卻后續(xù)復(fù)雜的鑒定步驟，供有關(guān)人員參考。一是在二次增菌后，直接使用一款單增李斯特菌驗(yàn)證培養(yǎng)基（HiMedia生產(chǎn)，貨號(hào)MV1552）來分離鑒別。該培養(yǎng)基是依據(jù)磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C（PIPLC）活性和α-甲基-D-甘露糖苷的發(fā)酵。磷脂酶C是一種重要的毒力因子，只有單核細(xì)胞增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌具有。單增和伊氏李斯特菌水解培養(yǎng)基中的底物，菌落周圍產(chǎn)生不透明的光暈。單增和伊氏的鑒別是通過α-甲基-D-甘露糖苷的發(fā)酵。單增為陽性，菌落有黃色光暈。伊氏則為陰性。該培養(yǎng)基含有鼠李糖，酚紅為指示劑。其培養(yǎng)反應(yīng)如下：

圖中標(biāo)號(hào)分別為1. 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、2. 伊氏李斯特菌、3. 英諾克李斯特菌、4. 斯氏李斯特氏菌

第二個(gè)方案是采用國標(biāo)推薦的李斯特菌顯色培養(yǎng)基（可使用HiMedia生產(chǎn)的，貨號(hào)MV1540，符合國標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)量可靠，價(jià)格低于同類進(jìn)口產(chǎn)品，可降低檢測成本），培養(yǎng)反應(yīng)如下：

但該類顯色培養(yǎng)基無法區(qū)分單增與伊氏李斯特菌，進(jìn)一步鑒別可直接使用李斯特菌生化鑒定試劑盒（內(nèi)含12種生化反應(yīng)，HiMedia生產(chǎn)，貨號(hào)KB0012A）。該試劑盒已包含木糖和鼠李糖的發(fā)酵反應(yīng)。產(chǎn)品外形如下圖：

如不想用生化鑒定試劑盒，可用另一款改良型李斯特菌顯色瓊脂（貨號(hào)M1417），它可區(qū)分單增與伊氏李斯特菌，如下圖：

35-37°C 培養(yǎng)24-48小時(shí)后，單增李斯特菌（左）——藍(lán)綠色菌落，帶黃色光暈。伊氏李斯特菌（右）——藍(lán)綠色菌落，無黃色光暈。但要注意，這款顯色培養(yǎng)基無法區(qū)分單增與英諾克李斯特菌。如果使用一款顯色培養(yǎng)基同時(shí)區(qū)分單增、伊氏和英諾克，還可采用單增李斯特菌快速鑒別瓊脂（貨號(hào)M1924）。其培養(yǎng)反應(yīng)如下圖所示：

其具體菌落特征如下：

參考文獻(xiàn)

1. 蘇靜  于烽  劉艷  遠(yuǎn)雪梅  馬鑫. 單增李斯特氏菌國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證與探討. 疾病預(yù)防控制通報(bào). 2015-06-24