HiMedia產(chǎn)品使用須知

HiMedia產(chǎn)品使用須知

• 應(yīng)遵守的基本預(yù)防措施

脫水培養(yǎng)基容易受潮，必須存放在陰涼干燥的地方，遠(yuǎn)離明亮的光線。 這些培養(yǎng)基**于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用。

仔細(xì)閱讀標(biāo)簽上給出的說明。請注意成分、使用方法和用途。另請注意效期和批號。使用前確保培養(yǎng)基沒有變質(zhì)（物理性質(zhì)上）。

培養(yǎng)基在下列條件下有結(jié)塊的趨向：

（i）儲存期間的濕度高

（ii）容器開放時間過長

（iii）每次使用后容器未密封

（iv）培養(yǎng)基儲存太久，以至于在效期后使用（不推薦）

• 脫水培養(yǎng)基的復(fù)溶

對于復(fù)溶，使用干凈、未損壞的玻璃器皿和蒸餾水或符合各國藥典純凈水規(guī)格的去離子水。將規(guī)定量的培養(yǎng)基放在干凈干燥的燒瓶中，其燒瓶體積應(yīng)比制備好的培養(yǎng)基體積大2-3倍。添加“部分規(guī)定體積”的蒸餾水，并漩渦溶解。現(xiàn)在從容器一側(cè)，逐漸添加其余量的水。在此階段，大多數(shù)肉湯培養(yǎng)基都澄清可溶。為了完全溶解，可使用明火，加熱板或沸水浴加熱，注意避免過度加熱或燒焦培養(yǎng)基。

微波爐也可用于煮沸，使完全溶解培養(yǎng)基。在微波爐中培養(yǎng)基初沸后，將其取出并輕輕攪拌。將培養(yǎng)基返回烤箱再次短時加熱，直到瓊脂顆粒完全溶解（總加熱時間約2-3分鐘）。

• 調(diào)pH值

用蒸餾水（或去離子水或純凈水）復(fù)溶的脫水培養(yǎng)基，其pH值即應(yīng)為標(biāo)簽上規(guī)定25°C時的pH值。如果培養(yǎng)基存放過久，建議在使用前檢查pH值并在必要時進(jìn)行校正。

對于液體培養(yǎng)基和復(fù)溶的固體（粉末/顆粒）培養(yǎng)基，其pH的測量和校正應(yīng)在25°C下進(jìn)行。對于熔融狀態(tài)的固體（粉末/顆粒）培養(yǎng)基，應(yīng)在40°C下驗(yàn)證其pH值。對于液體培養(yǎng)基，pH的測量應(yīng)在培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25°C時進(jìn)行。應(yīng)在無菌條件下取一份液體培養(yǎng)基，以用于測pH。對于固體（粉末/顆粒）培養(yǎng)基，應(yīng)在固體培養(yǎng)基冷卻至40℃時，在無菌條件下，取一份培養(yǎng)基用于測pH。溫度旋鈕應(yīng)調(diào)至40℃。對固體培養(yǎng)基pH值的測量，也可在滅菌后25℃下，使用表面電極進(jìn)行檢測，正如各國藥典所規(guī)定的。應(yīng)檢查pH值是否符合規(guī)定值。pH值校正可通過加入1N或0.1N鹽酸或氫氧化鈉溶液。對于從復(fù)溶培養(yǎng)基中取出的已知體積的樣品（例如50~100ml），通過加入的酸或堿的量，可在計(jì)算后，得出最終在剩余的制備好的培養(yǎng)基中所需加入酸或堿的量。

• 滅菌

濕熱滅菌

加壓蒸汽形式的濕熱被認(rèn)為是破壞一切生命形式（包括細(xì)菌孢子）的最可靠的方法。高壓滅菌器用于消毒細(xì)菌培養(yǎng)基，玻璃器皿和金屬制品。

準(zhǔn)備好要消毒的溶解的培養(yǎng)基，并按照標(biāo)簽上的方法消毒。通常是在121℃下滅菌15分鐘，在高壓蒸汽滅菌器內(nèi)進(jìn)行。有些培養(yǎng)基要求滅菌溫度為115°C或118°C，這取決于分別對應(yīng)于l0磅或12磅壓力的培養(yǎng)基的成分，溫度-壓力的關(guān)聯(lián)性列于表-1中。

*lbs -磅/平方英寸

應(yīng)不時地確定高壓滅菌的效率。高壓滅菌器內(nèi)的溫度并不均勻。這可將2瓶含2％葡萄糖和2％磷酸氫二鈉溶液放置在高壓滅菌器內(nèi)的不同地方的來檢測。

熱使溶液變成棕色。蒸汽入口附近的瓶子會另一個遠(yuǎn)離入口的瓶子棕色更深。強(qiáng)烈建議用戶嚴(yán)格要求按照標(biāo)簽上的說明進(jìn)行操作。

當(dāng)加入具有熱不穩(wěn)定性的增菌成分或增補(bǔ)劑時，應(yīng)在培養(yǎng)基滅菌冷卻后添加。培養(yǎng)基應(yīng)冷卻至室溫，瓊脂培養(yǎng)基按標(biāo)簽是冷卻至45-50℃，這時再無菌添加。一些含膽鹽的培養(yǎng)基，如XLD（木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽）瓊脂（M031/GM031），Hektoen Enteric瓊脂（M467/GM467），紫紅膽汁瓊脂（M049/GM049）不應(yīng)高壓滅菌。加熱培養(yǎng)基至沸點(diǎn)（100°C，30分鐘）就足夠了。重要的是按標(biāo)簽說明操作。

滅菌檢查

建議定期檢查所有高壓滅菌器以確保其工作正常和高效。應(yīng)測量溫度和壓力讀數(shù)。蒸汽質(zhì)量必須檢查，包括蒸汽閥和安全閥。滅菌器內(nèi)放培養(yǎng)基的每一處都應(yīng)達(dá)到理想溫度。不要使高壓滅菌器超載，應(yīng)使蒸汽在滅菌器內(nèi)圍繞內(nèi)容物自由流動。培養(yǎng)基滅菌時，用無吸附性的棉塞或蓋子來塞試管或燒瓶，蓋子擰松。在一些情況下，必須使用生物指標(biāo)劑，以證明高壓滅菌器的滅菌能力。化學(xué)指示劑用于證實(shí)溫度達(dá)到或超過的情況。和有些指示劑能指示特定溫度保持的時間。

分次滅菌

在開發(fā)出高壓滅菌器之前，液體和其他物品滅菌是通過在100℃下暴露于自由流動的蒸汽中完成，連續(xù)3天，每次30分鐘。該方法稱為分次滅菌。因?yàn)槊刻於纪瓿梢徊糠帧ｋS著高技術(shù)設(shè)備的開發(fā)和新的化學(xué)品出現(xiàn)，分次滅菌已經(jīng)在現(xiàn)代微生物學(xué)中重新獲得了重要性。

沸水浴

濕熱通過使蛋白質(zhì)變性來殺死微生物。浸入沸水中是幾種濕熱方法中的**種。

含有瓊脂、明膠或任何其他凝膠劑的培養(yǎng)基必須加熱，以完全溶解培養(yǎng)基。然而不能單純依靠沸騰來滅菌。

巴氏殺菌

它與滅菌不同。其目的是減少液體如牛奶中的細(xì)菌，并破壞可能引起變質(zhì)和人類疾病的有機(jī)體。巴氏滅菌不會影響孢子。

過濾滅菌

雖然加熱能有效控制微生物，但并不能到處使用。隨著19世紀(jì)最后10年人們對病毒的興趣在增長，過濾器逐漸在微生物學(xué)得到顯著的應(yīng)用。過濾器是去除溶液中微生物的機(jī)械裝置。過濾除菌可在真空下進(jìn)行。當(dāng)液體通過濾器時，有機(jī)體被攔在了濾膜微孔上。有幾種類型的濾器可用，例如無機(jī)濾器、有機(jī)濾器。薄膜濾器是第三種類型，得到廣泛接受。在培養(yǎng)基制備中，薄膜濾器被廣泛使用的孔徑為0.22μ和0.45μ。

空氣也可過濾除去微生物。常用的是HEPA濾網(wǎng)。它可以去除99％以上的顆粒，包括直徑＞0.3微米的微生物。

干熱滅菌

干熱滅菌時間在160℃下為120分鐘。它適用于玻璃器皿、屬器具等材料，它們能承受更高的溫度。

直接火焰

最快速的滅菌方法是使用直接火焰進(jìn)行灼燒。可用本生燈的火焰，對細(xì)菌接種環(huán)加熱幾秒鐘進(jìn)行消毒。這常在取樣前和接種后進(jìn)行。

HiLoop電動消毒器

也可以使用接種環(huán)電動消毒器（LA832）進(jìn)行灼燒。建議最多接觸10-15秒。

γ照射

伽馬照射需要長時間照射消毒。伽瑪射線是由放射性同位素鈷60產(chǎn)生的。支原體的風(fēng)險總是潛伏在原料中。此外，支原體可通過0.2μm過濾器和在不產(chǎn)生pH變化或培養(yǎng)基渾濁的情況下達(dá)到高滴度，使其成為一種無形的威脅。在這種情況下，提供**質(zhì)量保證的謹(jǐn)慎的一步是提供伽瑪輻照過的材料。γ輻射不會影響產(chǎn)品性能，卻能使污染清除。這已通過一些比較研究而證實(shí)。

化學(xué)消毒

化學(xué)因子可有效地用于控制微生物的生長，即使它們沒有實(shí)現(xiàn)完全滅菌。大多數(shù)消毒劑具有一些毒性作用，因此必須遵循安全規(guī)范。設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室都可以通過熏蒸甲醛氣體或紫外線照射來排除污染。