各種Vero細胞培養(yǎng)液的成分比較

近10年來，低血清和無血清Vero細胞培養(yǎng)基的開發(fā)受到了重視，一些研究機構(gòu)發(fā)布了自己的研究結(jié)果。其中，無血清細胞培養(yǎng)基開發(fā)的難度**，因為無血清培養(yǎng)系統(tǒng)中的細胞對于極端的pH值、溫度、滲透壓、機械力和酶處理更為敏感。換用無血清培養(yǎng)基時，每次傳代常需采用較高的密度接種細胞，有時細胞還需要馴化。性能**的細胞培養(yǎng)基則要求能促進細胞的生長、存活率和細胞活力，培養(yǎng)的病毒增殖較快，同時價格不過于昂貴。

許多低血清和無血清Vero細胞培養(yǎng)基以傳統(tǒng)的合成培養(yǎng)基為基礎(chǔ)。有機構(gòu)研究了DMEM／F12、M199、RPMI1640及MEM∶DMEM／F12四種培養(yǎng)基對流感病毒增殖的影響1。具體過程為：在上述培養(yǎng)基中分別加入濃度為1.0μg／ml的 TPCK胰酶，配制病毒培養(yǎng)液，調(diào)整pH為8.0。將T-225細胞培養(yǎng)瓶中長成致密單層的SFM-Vero細胞，經(jīng)0.125%的胰蛋白酶消化后傳代后，置37℃培養(yǎng)36h；洗液洗滌3次，以MOI = 0.1接種H5N1流感病毒，33℃吸附1h；加入病毒培養(yǎng)液，置33℃培養(yǎng)72h，收獲病毒液，測定血凝效價。結(jié)果顯示，**細胞培養(yǎng)時間為36 h。以DMEM／F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基時，病毒收獲液的血凝效價均高于其他培養(yǎng)基，M199僅次于DMEM／F12。

又有機構(gòu)比較了含10%新生牛血清的M199和MEM培養(yǎng)基對Vero細胞生長的影響。發(fā)現(xiàn)M199顯著好于MEM。M199培養(yǎng)的細胞活力為94.35%，MEM為80.50%，M199的細胞濃度為60萬/ml，而MEM為47.5萬/ml2。

由于細胞培養(yǎng)基的成分較為復雜，且各個成分對細胞培養(yǎng)存在一定的協(xié)同作用，故以上結(jié)論僅作一定程度上的參考。DMEM／F-12是DMEM和F-12以1:1的比例混合而成，F(xiàn)-12配方則是以Ham's F-10 培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，提高了膽堿、肌醇、腐胺和幾種氨基酸的濃度，最初是用于在無血清的條件下培養(yǎng) CHO 細胞。M199培養(yǎng)基則常用于疫苗生產(chǎn)、病毒學以及多種非轉(zhuǎn)化細胞的培養(yǎng)。最初的開發(fā)目的是找到一種成分明確的、不含動物來源成分的培養(yǎng)基。有報道將M199改良后，Vero細胞培養(yǎng)效果優(yōu)于M199，且病毒滴度更高3。

SFRE M199即是一款M199的改良型，最初用于原代狒狒腎(Bak)細胞的生長和維持，后用于Vero細胞的貼壁培養(yǎng)。它在M199培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加了胰島素、丙酮酸鈉、硫酸鋅，并提高了精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、L -谷氨酰胺、L -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸和葡萄糖的濃度。它還添加了半乳糖，以避免乳酸過度積累，并使pH值在細胞延長的維持期內(nèi)，保持在生理范圍。國際知名生物科學公司HiMedia生產(chǎn)有SFRE M199的1型和2型。二者均含有L-谷氨酰胺、半乳糖和葡萄糖。SFRE M199-2（貨號AT090）含有Earle's鹽，而SFRE M199-1含有Hank鹽。兩種鹽的主要差別在于碳酸氫鈉的水平, 碳酸氫鈉在Eagles (2.2g/L)比在Hanks (0.35g/L) 中高。選用哪種取決于培養(yǎng)環(huán)境中的CO2濃度。

SFRE M199-1與DMEM／F-12的成分作比較，可以發(fā)現(xiàn)，SFRE M199-1不含DMEM／F-12所含有的硫酸銅、硫酸亞鐵、亞油酸、腐胺、硫鋅酸，但含有DMEM／F-12所不含的核苷類成分，如一磷酸腺苷、胸腺嘧啶、尿嘧啶、脫氧核糖、硫酸腺嘌呤等，這些成分都與DNA的合成有關(guān)。另外，在一些共有成分上，兩種培養(yǎng)基的成分濃度互有高低，如SFRE M199-1的甘氨酸、丙氨酸、天門冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、酪氨酸、生物素、丙酮酸鈉的濃度都比DMEM／F-12要高，DMEM／F-12的異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、泛酸鈣、葉酸、吡哆醛鹽酸鹽、肌醇、葡萄糖、次黃嘌呤濃度比SFRE M199-1的成分濃度高。

目前，由于配方保密，關(guān)于Vero細胞無血清或低血清培養(yǎng)基的具體成分并未完全公開。由于改良型M199以及Vero細胞用SFRE M199培養(yǎng)時有報道3、4、5可見想見，SFRE M199取代M199來大規(guī)模培養(yǎng)Vero細胞，是將來發(fā)展的趨勢。

HiMedia Laboratories公司是國際**的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家，其生產(chǎn)通過了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP的質(zhì)量管理體系認證。締一生物作為中國區(qū)代理商，在生物制藥，疫苗生產(chǎn)，科研，臨床治療等領(lǐng)域，提供有優(yōu)質(zhì)可靠的各種培養(yǎng)基及進口血清、支原體檢測試劑等，持續(xù)不斷地為中國生物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展助力。

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參考文獻

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2. 薛英，等.不同培養(yǎng)基及不同的葡萄糖濃度對VERO細胞生長狀況的影響.草食家畜.2010,12(4):70-71

3. 陳嘉雯,等.改良M199培養(yǎng)基在Vero細胞培養(yǎng)中的適用性.中國生物制品血雜志.2014,1(27):76-81

4. 吳長安. 無血清化學限定培養(yǎng)基對原代細胞的培養(yǎng)及其對病毒的敏感性. 國外醫(yī)學.生物制品分冊. 1981, 4:190-191

5. Jack Litwin. The growth of Vero cells as suspended aggregates in serum-free medium.Animal Cell Technology, 1992: 414-417