HiMedia生產的快速鑒定紙的第三方獨立驗證

HiMedia生產的快速鑒定紙的第三方獨立驗證

HiMedia laboratories公司生產的HiDtect快速鑒定紙是得到CE認證（歐洲）的，認為符合文件98/79/EC中的“In Vitro Diagnostic Medical Devices Directive， Annex III”條款。同時，這類細菌學輔助鑒別產品生產工藝也通過了世界衛生組織的GMP認證，以及ISO13485（醫療器械）和ISO9001認證。

對HiDtect的第三方驗證是在2013年由印度一家環境科學實驗室進行的。主要鑒定了最有代表性的5個產品：DT010，DT001，DT002，DT008，DT011。

DT011是對食品致病菌的快速鑒定。選擇了10張鑒定紙進行檢驗。

驗證采用的標準菌株如下：

• 大腸埃希氏菌（ATCC 9132）

• 大腸埃希氏菌O157：H7(NCTC 12900)

• 金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）

• 鼠傷寒沙門氏菌(ATCC 23564)

• 蠟樣芽孢桿菌（ATCC 10876）

• 單核細胞增生李斯特氏菌（ATCC 19111）

• 福氏志賀氏菌（ATCC 25908）

驗證采用的傳統培養基如下：

• 通用培養基：TSA

• 增菌培養基：緩沖蛋白胨水

• 選擇性培養基：麥康凱瓊脂，Baird Parker瓊脂，XLD瓊脂，MYP瓊脂，PALCAM瓊脂和DCA培養基

• 驗證培養基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養基，西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂，兔血漿，尿素瓊脂和Andrade蛋白胨水，以及鼠李糖和木糖紙片

驗證采用了2種方法，分別為快速鑒定紙的操作方法（HiMedia公司提供）和實驗室內采用培養基驗證菌種的SOP（EL/WI/5.6.3.3a）

驗證采用了魚制品作為食品樣品。

操作人員將上述標準菌株接種在營養肉湯中，用于檢驗菌種純度，并通過各自對應的選擇培養基劃線分離和進行生化試驗。

操作人員將上述標準菌株也接種到魚制品中。將該制品接種到緩沖蛋白胨水中增菌18-24小時（35-37℃），使增菌后的接種量達到10-100cfu/ml）。進行梯度稀釋，以使菌落獲得**純化。

取上述增菌后的不同稀釋度的樣品，在TSA平板上涂抹，在35-27度18-24小時進行孵育。用無菌鑷子在無菌環境下夾起鑒定紙，用記號筆標記以便于定位。將鑒定紙放到TSA平板表面，二者接觸30秒到1分鐘。然后將鑒定紙轉移到無菌的空白皿中，倒置孵育35-37℃、1-4小時。

將另外的TSA平板分為4個象限/板，上述標準菌株分別接種到不同象限中，孵育35-37℃、18-24小時。也用鑒定紙進行轉印并孵育，步驟同上。

結果顯示，在HiDtect鑒定紙上，各個菌株的實際顯現顏色和預期基本一致，即：大腸埃希氏菌-紫色（相符）

金黃色葡萄球菌-金黃色（相符）

鼠傷寒沙門菌/福氏志賀氏菌-無色（相符）

蠟樣芽胞桿菌-淺綠色（大菌落）（相符）

單核細胞增生李斯特氏菌 預期是藍綠色，實際顯示為藍色。

大腸埃希氏菌O157：H7預期為粉紫色，實際為紫色。

傳統培養基的鑒定結果如下：

傳統培養基進行定量的結果如下：

采用HiDtect方法進行定量的結果如下：

結論：

HiDtect快速鑒定紙DT010能快速鑒定下列微生物：大腸埃希氏菌、大腸埃希氏菌O157：H7、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門菌/福氏志賀氏菌、蠟樣芽胞桿菌、單核細胞增生李斯特氏菌。DT010鑒定紙能對食品病原菌快速可靠的檢測，在35-37℃孵育1-4小時內可顯示出顏色變化。

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DT001  尿道病原菌快速鑒定紙

使用的標準菌株包括：

大腸埃希氏菌——ATCC 9132

肺炎克雷伯菌——NCIM 2706

金黃色葡萄球菌——ATCC 25923

銅綠假單胞菌——NCIM 2036

糞腸球菌——NCIM 2080

使用的培養基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養基：麥康凱瓊脂，Baird Parker瓊脂，牛奶瓊脂，Slanetz Bartley瓊脂

驗證培養基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養基，西蒙檸檬酸鹽瓊脂，兔血漿，氧化酶紙片，乙基紫疊氮鈉葡萄糖肉湯（(EVB）

流程同上，只不過沒有使用魚制品，直接接種在營養肉湯中。另TSA平板不是四等分，而是五等分，分別接種標準菌株。

觀察結果如下：

HiDtect方法，基本相符

傳統培養基的方法

HiDtect定量方法的培養反應

傳統培養基定量方法的培養反應

結論：

快速鑒定紙DT001可用于快速鑒定下列菌：大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌，DT010鑒定紙能對食品病原菌快速可靠的檢測，在35-37℃孵育1-4小時內可顯示出顏色變化。

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DT002  沙門氏菌快速鑒定紙

使用的標準菌株包括：

大腸埃希氏菌——ATCC 9132

鼠傷寒沙門氏菌——ATCC 23564

腸炎沙門氏菌——ATCC 13076

使用的培養基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養基：麥康凱瓊脂，XLD瓊脂

驗證培養基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養基，西蒙檸檬酸鹽瓊脂，尿素瓊脂

采用的樣品是肉

流程同上。標準菌株也接種到樣本肉上，之后進行增菌和稀釋。取樣是0.1ml。TSA是分成3個象限。

結果如下：

HiDtect方法：

傳統培養基方法的培養反應：

傳統培養基的定量結果

HiDtect方法的定量結果

結論：快速鑒定紙DT002可用于快速鑒定下列菌：鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌。DT002鑒定紙能對食品病原菌快速可靠的檢測，在35-37℃孵育1-4小時內可顯示出顏色變化。

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DT008  大腸埃希氏菌雙驗證的快速鑒定紙

使用的標準菌株包括：

大腸埃希氏菌——ATCC 9132

金黃色葡萄球菌——ATCC25923

培養基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養基：麥康凱瓊脂，Baird Parker瓊脂

驗證培養基：TSI，蛋白胨水，MR-VP培養基，西蒙檸檬酸鹽瓊脂，兔血漿

參照樣品：飲用水

將標準菌株也接種到水樣中。TSA平板分成2個象限。其余流程同上。

結果觀察：

HiDtect方法

傳統培養基方法

傳統培養基的定量結果

HiDtect方法的定量結果

結論：快速鑒定紙DT008對大腸埃希氏菌進行了檢測。DT002鑒定紙能對食品病原菌作快速可靠的檢測，在35-37℃孵育1-4小時內可顯示出顏色變化。

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DT011  芽孢桿菌快速鑒定紙

使用的標準菌株包括：

蠟樣芽胞桿菌——ATCC 10876

枯草芽孢桿菌——ATCC 6633

蘇云金芽孢桿菌——ATCC 10792

培養基包括：

TSA，緩沖蛋白胨水

選擇性培養基：MYP瓊脂

驗證培養基：葡萄糖瓊脂

參照樣品：

即食食品（大米）

將標準菌株接種到即食大米中，TSA平板分為3個象限，其余同上。

結果觀察：

HiDtect
方法

傳統培養基方法

傳統培養基方法的培養反應（定量）

HiDtect方法的培養反應（定量）

結論：

快速鑒定紙DT011對下列菌進行了測試：蠟樣芽胞桿菌、枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌。DT011鑒定紙能對這些食品病原菌作快速可靠的檢測，在35-37℃孵育1-4小時內可顯示出顏色變化。