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常規培養法檢測大腸埃希氏菌 O157:H7/NM

2018-11-20 09:32來源:締一生物


大腸桿菌O157:H7是腸出血性大腸桿菌中的代表種類,在世界范圍內多次爆發,造成了重大的經濟損失,因此,該菌在食品安全等方面具有重要的研究意義。本文締一生物為您介紹常規培養法檢測大腸埃希氏菌O157:H7/NM操作步驟如下:


1增菌

以無菌操作取檢樣25g(或25mL)加入到含有225mL mEC+新生霉素肉湯的均質袋中,在拍擊式均質器上連續均質1min~2min;或放入盛有225mL mEC+新生霉素肉湯的均質杯中,8000r/min~10000r/min均質1min~2min。36℃±1℃培養18h~24h。


2分離

取增菌后的mEC+n肉湯,劃線接種于CT-SMAC平板和大腸埃希氏菌O157顯色瓊脂平板上,36℃±1℃培養18h~24h,觀察菌落形態。在CT-SMAC平板上,典型菌落為圓形、光滑、較小的無色菌落,中心呈現較暗的灰褐色;在大腸埃希氏菌O157顯色瓊脂平板上的菌落特征按產品說明書進行判定。


締一生物為您推薦一款CT-SMAC平板,國際上HiMedia公司生產的,大腸桿菌O157:H7顯色培養基(貨號:M1340),又名為麥康凱山梨醇培養基,是用于從食物和動物飼料中選擇性分離大腸桿菌O157:H7。培養基中含有山梨醇。大腸菌群如肺炎克雷伯菌發酵山梨醇,產生粉紅色菌落,大腸桿菌O157:H7不發酵山梨醇,為無色菌落。普通大腸桿菌則被鑒別為藍綠色,大多數革蘭氏陽性菌被結晶紫和膽鹽抑制。


本品還有化學限定培養基可選,有效避免患瘋牛病的風險。符合國標GB4789.36—2016大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗CT-SMAC平板試劑規定。HiMedia公司生產的培養基生產均通過了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP認證和CE認證,產品質量有保障。


3初步生化試驗

在CT-SMAC和大腸埃希氏菌O157顯色瓊脂平板上分別挑取5個~10個可疑菌落,分別接種TSI瓊脂,同時接種MUG-LST肉湯,并用大腸埃希氏菌株(ATCC25922或等效標準菌株)做陽性對照和大腸埃希氏菌O157:H7(NCTC12900或等效標準菌株)做陰性對照,于36℃±1℃培養18h~24h。必要時進行氧化酶試驗和革蘭氏染色。


在TSI瓊脂中,典型菌株為斜面與底層均呈黃色,產氣或不產氣,不產生硫化氫(H2S)。置MUG-LST肉湯管于長波紫外燈下觀察,MUG陽性的大腸埃希氏菌株應有熒光產生,MUG陰性的應無熒光產生,大腸埃希氏菌O157:H7/NM為MUG試驗陰性,無熒光。挑取可疑菌落,在營養瓊脂平板上分純,于36℃±1℃培養18h~24h,并進行下列鑒定。


4鑒定

4.1血清學試驗

在營養瓊脂平板上挑取分純的菌落,用O157和H7診斷血清或O157乳膠凝集試劑作玻片凝集試驗。對于H7因子血清不凝集者,應穿刺接種半固體瓊脂,檢查動力,經連續傳代3次,動力試驗均陰性,確定為無動力株。如使用不同公司生產的診斷血清或乳膠凝集試劑,應按照產品說明書進行。


4.2生化試驗

4.2.1自營養瓊脂平板上挑取菌落,進行生化試驗。大腸埃希氏菌O157:H7/NM生化反應特征見表1。

4.2.2如選擇生化鑒定試劑盒或微生物鑒定系統,應從營養瓊脂平板上挑取菌落,用稀釋液制備成濁度適當的菌懸液,使用生化鑒定試劑盒或微生物鑒定系統進行鑒定。

4.3毒力基因測定(可選項目)

樣品中檢出大腸埃希氏菌O157:H7或O157:NM時,如需要進一步檢測Vero細胞毒素基因的存在,可通過接種Vero細胞或HeLa細胞,觀察細胞病變進行判定;也可使用基因探針檢測或聚合酶鏈反應(PCR)方法進行志賀毒素基因(stx1、stx2)、eae、hly等基因的檢測。如使用試劑盒檢測上述基因,應按照產品的說明書進行。


HiMedia公司檢測大腸埃希氏菌O157:H7/NM可用產品:


用途

品名

貨號

增菌

改良 EC 肉湯

M1285

增菌

新生霉素(加入改良EC肉湯)

FD096

選擇性分離

CT-SMAC 平板(HiCrome MacConkey Sorbitol Agar Base+添加劑)

M1340,FD147

選擇性分離

大腸埃希氏菌O157顯色瓊脂平板(添加劑)

MV1575A,FD187

初步生化試驗

三糖鐵瓊脂

MV021

初步生化試驗

MUG-LST肉湯

MV1046

純培養

營養瓊脂

MV877

血清學鑒定

O157乳膠凝集試驗

LK13-50NO

生化鑒定

HiE.Coli 生化鑒定試劑盒

KB010



締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養和檢測領域,一如既往地為您帶來優質的服務。


如需詳細了解,可訪問公司官網:http://m.13851990668.com/;咨詢電話:400-166-8600。