霍亂弧菌的分離與鑒定

霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一，屬于國際檢疫傳染病，曾在世界上引起多次大流行。霍亂弧菌是該病的病原體，學名V.cholera，屬弧菌科，是一種革蘭氏陰性菌。

人類在自然情況下是霍亂弧菌的主要易感者，通過污染的水源或飲食物經口傳染。在一定條件下，霍亂弧菌進入小腸后，依靠鞭毛的運動，穿過粘膜表面的粘液層，可能藉菌毛作用粘附于腸壁上皮細胞上，在腸粘膜表面迅速繁殖，經過短暫的潛伏期后便急驟發病。該菌不侵入腸上皮細胞和腸腺，也不侵入血流，僅在局部繁殖和產生霍亂腸毒素，此毒素作用于不粘膜上皮細胞與腸腺使腸液過度分泌，從而患者出現上吐下瀉，瀉出物呈“米泔水樣”并含大量弧菌，此為本病典型的特征。

霍亂弧菌分離與鑒定方法

生化鑒定

生化鑒定前，先分離霍亂弧菌，通常情況下，霍亂弧菌在TCBS培養基上典型霍亂弧菌菌落為黃色，扁平，真徑 2-3 mm；副溶血弧菌菌落呈圓形，邊緣整齊、濕潤、稍混濁、半透明，多數具尖心、斗笠狀，藍綠色菌落，直徑2-4 mm。

但傳統TCBS培養基上的其他的蔗糖發酵菌會影響TCBS瓊脂上弧菌的鑒定，影響檢測結果。或選用顯色培養基分離，締一生物為您推薦HiMedia公司（國際知名微生物公司）的HiCrome弧菌顯色培養基（貨號：MV1682），在該培養基上細菌β-半乳糖苷酶和培養基中所包含底物發生反應，使霍亂弧菌呈現紫色菌落；同時可以分離出副溶血性弧菌，呈現藍綠色菌落，可初步確認副溶血性弧菌和霍亂弧菌的存在。

可選用HiMedia公司HiBio-IDTM弧菌生化鑒定卡（貨號：KB007）， 12種生化反應：

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2.血清凝集法

   根據弧菌O抗原不同，分成Ⅵ個血清群，第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個血清型：含AC者為原型（又稱稻葉型），含AB者為異型（又稱小川型），A、B、C均有者稱中間型（彥島型）。

  1992年10月在印度東南部又發現了一個引起霍亂流行的新血清型菌株（0139），它引起的霍亂在臨床表現及傳播方式上與古典型霍亂完全相同，但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集，抗01群的抗血清對0139菌株無保護性免疫。在水中的存活時間較01群霍亂弧菌長，因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株。

3.核酸擴增法

  核酸擴增兩端，然后在體外模擬DNA體內復制的過程反復擴增，使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測出來。技術，即聚合酶鏈式反應（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是設計、合成兩條寡核苷酸，作為引物，對應于待測病原微生物某一段特異性序列。

由霍亂弧菌引起的霍亂疾病，對人類健康危害很大，有效的檢測鑒定出霍亂弧菌對人類健康有著重要意義。

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