**揭示奧羅普切病毒在人細(xì)胞中的復(fù)制機(jī)制

人們對(duì)來(lái)自病毒科Peribunyaviridae的病毒復(fù)制機(jī)制知之甚少。從公共衛(wèi)生的角度來(lái)看，它們是重要的病原體。在巴西，在病毒科Peribunyaviridae中，僅奧羅普切病毒（Oropouche virus）感染引起疾病，而導(dǎo)致出血熱的拉克羅斯腦炎病毒（La Crosse encephalitis virus）和克里米亞剛果病毒（Crimean Congo virus）在世界其他地區(qū)流行。此外，這個(gè)病毒科的其他一些成員在牛群中引發(fā)疾病。

奧羅普切病毒感染的癥狀類似于登革熱病毒感染引起的登革熱，主要包括關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)痛、眼后疼痛和高燒。與登革熱不同之處在于，在大約一半的奧羅普切病毒感染病例中，這種疾病在癥狀改善之后復(fù)發(fā)。

奧羅普切病毒是由一種被稱作Culicoides paraenses的蠓科小蠅傳播的。據(jù)估計(jì)，在巴西亞馬遜地區(qū)的村莊和城鎮(zhèn)爆發(fā)了50萬(wàn)例病例，但是這種病毒也已出現(xiàn)在該國(guó)的其他地區(qū)。專家們認(rèn)為它是一種新出現(xiàn)的病毒。

這種疾病肯定被低估了，這是因?yàn)樗?jīng)常與其他的蟲媒病毒混淆在一起。此外，體外實(shí)驗(yàn)已表明奧羅普切病毒能夠感染小鼠和倉(cāng)鼠中的神經(jīng)元。令人擔(dān)憂的是，科學(xué)家們并不知道從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看，這種病毒感染是否會(huì)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成損傷和造成多大的損傷。這種病毒似乎能夠感染多種類型的細(xì)胞。換言之，它成功地與位于人細(xì)胞表面上的不同受體相互作用。但是，迄今為止，人們并不知道這些受體的身份。

在一項(xiàng)新的研究中，為了研究奧羅普切病毒在人細(xì)胞中的復(fù)制機(jī)制，來(lái)自巴西圣保羅大學(xué)和德國(guó)圖賓根大學(xué)醫(yī)院的研究人員利用源自人宮頸癌細(xì)胞的HeLa細(xì)胞在體外開展實(shí)驗(yàn)。一旦這些細(xì)胞被奧羅普切病毒感染，這種病毒就開始產(chǎn)生

招募宿主ESCRT蛋白復(fù)合物到高爾基體外膜上的蛋白。ESCRT蛋白復(fù)合物隨后推壓高爾基體外膜，導(dǎo)致它破裂，從而攜帶著病毒基因組進(jìn)入高爾基體中。因此，這種病毒在高爾基體內(nèi)復(fù)制。隨后可能發(fā)生的情況是在一段時(shí)間后，發(fā)生變化的充滿著病毒的高爾基體與細(xì)胞膜融合，從而將這些病毒釋放到胞外基質(zhì)中。相關(guān)研究結(jié)果近期發(fā)表在PLoS Pathogens期刊上，論文標(biāo)題為“ESCRT machinery components are required for Orthobunyavirus particle production in Golgi compartments”。論文通信作者為圣保羅大學(xué)的Eurico Arruda和Luis L. P. daSilva。

已知其他的病毒也會(huì)招募ESCRT蛋白復(fù)合物用于復(fù)制。比如，作為導(dǎo)致艾滋病的病原體，HIV利用ESCRT蛋白復(fù)合物跨過(guò)將胞外基質(zhì)和胞內(nèi)基質(zhì)分隔開的細(xì)胞膜。然而，在這項(xiàng)新的研究中，這些研究人員**發(fā)現(xiàn)奧羅普切病毒通過(guò)招募ESCRT蛋白復(fù)合物侵入高爾基體中進(jìn)行復(fù)制的新機(jī)制。

高爾基體是由一系列堆疊在一起的膜和囊泡組成的，它的主要功能是加工、儲(chǔ)存和分送核糖體中產(chǎn)生的蛋白。daSilva說(shuō)，“我們并不確切地知道對(duì)高爾基體的劫持是如何影響宿主細(xì)胞的，但是HeLa細(xì)胞在遭受感染大約36小時(shí)后死亡。”

在之前的一項(xiàng)研究中，Arruda及其團(tuán)隊(duì)證實(shí)奧羅普切病毒產(chǎn)生一種被稱作NSs的蛋白，這種蛋白誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡。Arruda說(shuō)，“這種蛋白不是這種病毒結(jié)構(gòu)的一部分，而且我們不知道通過(guò)細(xì)胞凋亡殺死宿主細(xì)胞如何有益于這種病毒，但它可能是一種防御機(jī)制的結(jié)果。分離出的NSs蛋白能夠?qū)е录?xì)胞凋亡，比如，它可能被用來(lái)殺死腫瘤細(xì)胞。”

潛在靶標(biāo)

在這項(xiàng)新的研究中，這些研究人員在實(shí)驗(yàn)室中對(duì)HeLa細(xì)胞進(jìn)行基因操縱，使得它們不再表達(dá)一種重要的被稱作Tsg101的ESCRT蛋白。為此做到這一點(diǎn)，他們采用了RNA干擾技術(shù)，即一種通過(guò)導(dǎo)入短RNA序列到細(xì)胞中來(lái)阻斷基因表達(dá)的方法。

daSilva說(shuō)，“這種干預(yù)使得HeLa細(xì)胞更強(qiáng)有力地抵抗奧羅普切病毒感染。它們需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能死亡，而且具有更少的病毒載量。已存在抑制Tsg101的實(shí)驗(yàn)性藥物，而且我們?nèi)缃褚獪y(cè)試它們抵抗奧羅普切病毒感染的能力。”他補(bǔ)充道，鑒于Tsg101在人細(xì)胞的正常功能中起著關(guān)鍵的作用，因此可能無(wú)法使用抑制它或其他的ESCRT蛋白的藥物來(lái)治療患者。畢竟，不良副作用的風(fēng)險(xiǎn)可能是相當(dāng)大的。

這些研究人員計(jì)劃確定奧羅普切病毒產(chǎn)生哪些蛋白來(lái)招募ESCRT復(fù)合物。daSilva說(shuō)，“它們可能也是值得探究的阻止這種感染的潛在靶標(biāo)。”